奧林巴斯 CKX53 顯微鏡在細胞培養(yǎng)分析觀察中應(yīng)用廣泛,以下從觀察前準(zhǔn)備、觀察內(nèi)容及要點、結(jié)果分析等方面進行介紹:
奧林巴斯CKX53顯微鏡觀察前準(zhǔn)備
細胞培養(yǎng):根據(jù)細胞類型選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,如貼壁細胞需使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,在 37℃、5% CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),確保細胞處于良好的生長狀態(tài)。
耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、蓋玻片等耗材,確保其無菌且無雜質(zhì),避免對細胞觀察造成干擾。
顯微鏡調(diào)試:打開顯微鏡電源,預(yù)熱 15 - 30 分鐘,使光源穩(wěn)定。調(diào)整光源強度至合適水平,將物鏡轉(zhuǎn)至低倍鏡(如 4x),調(diào)節(jié)焦距,使載物臺處于合適位置,準(zhǔn)備放置樣本。
奧林巴斯CKX53顯微鏡觀察內(nèi)容及要點
細胞形態(tài)
整體形態(tài):在低倍鏡下觀察細胞的整體形態(tài),判斷細胞是圓形、梭形、多邊形等,例如成纖維細胞多呈梭形,上皮細胞多為多邊形。
細胞邊界:觀察細胞邊界是否清晰,清晰的邊界表明細胞狀態(tài)良好,若邊界模糊,可能存在細胞損傷或病變。
細胞突起:某些細胞如神經(jīng)細胞會有突起,注意觀察突起的數(shù)量、長度和形態(tài),若突起減少或形態(tài)異常,可能提示細胞功能異常。
細胞生長狀態(tài)
細胞密度:通過低倍鏡觀察細胞在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的密度,判斷細胞是否生長至匯合狀態(tài),一般細胞匯合度達到 80% - 90% 時需要進行傳代。
細胞分裂:在高倍鏡下觀察細胞是否處于分裂期,注意分裂相的形態(tài)和數(shù)量,正常細胞分裂相形態(tài)規(guī)則,若出現(xiàn)異常分裂相,如多極分裂等,可能是細胞發(fā)生了癌變等異常情況。
細胞凋亡:觀察細胞是否有凋亡特征,如細胞皺縮、核染色質(zhì)凝聚、出現(xiàn)凋亡小體等,例如用 DAPI 染色后,在熒光顯微鏡下可清晰觀察到凋亡細胞的核染色質(zhì)凝聚現(xiàn)象。
細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)
細胞核:觀察細胞核的形態(tài)、大小和位置,正常細胞核呈圓形或橢圓形,位于細胞中央。若細胞核形態(tài)不規(guī)則、出現(xiàn)核畸形等,可能與細胞病變有關(guān)。
細胞質(zhì):注意細胞質(zhì)的顏色、透明度和有無顆粒等,如細胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡,可能是細胞受到損傷或代謝異常。
細胞器:在高倍鏡或油鏡下,可觀察到一些細胞器的形態(tài)和分布,如線粒體呈棒狀或粒狀,若線粒體腫脹、變形,可能影響細胞的能量代謝。
奧林巴斯CKX53顯微鏡結(jié)果分析
細胞生長曲線繪制:通過定期觀察細胞密度,以時間為橫坐標(biāo),細胞密度為縱坐標(biāo),繪制細胞生長曲線,了解細胞的生長速率、對數(shù)生長期和平臺期等,評估細胞的生長狀態(tài)和增殖能力。
細胞活力計算:采用臺盼藍染色法等,計算活細胞和死細胞的比例,評估細胞活力。正常細胞活力應(yīng)在 90% 以上,若細胞活力過低,可能是培養(yǎng)條件不合適或細胞受到了損傷。
異常細胞分析:對觀察到的異常細胞,如形態(tài)異常、生長異常的細胞,結(jié)合細胞培養(yǎng)條件和實驗?zāi)康?,分析可能的原因,如是否受到污染、藥物處理是否產(chǎn)生毒性等,必要時進行進一步的檢測和驗證。